為什么蛋白實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性差？為什么明明是同一管樣品，再次使用就沒有結(jié)果了呢？當(dāng)你還在冥思苦想的時候，蛋白可能已經(jīng)在悄悄降解了……

圖1 蛋白降解圖

世界上沒有兩個完全一樣的東西，正如世界上不會出現(xiàn)兩個降解程度一模一樣的蛋白。

如圖1所示，不同樣品甚至不同泳道上的蛋白降解程度都是不一樣的。泳道2中蛋白降解非常嚴(yán)重，以至于在顯影后無法檢測到；泳道3-1，3-2中蛋白部分降解，顯影后下方出現(xiàn)降解條帶，當(dāng)?shù)鞍捉到獬潭仍僦貢r，會出現(xiàn)不同長度的蛋白降解條帶，呈現(xiàn)彌散狀或直接無法檢測。

在體外研究中，蛋白合成過程終止后，降解作用大大增強(qiáng)，其中蛋白酶在蛋白降解過程中發(fā)揮著重要作用。

蛋白酶是水解蛋白質(zhì)肽鏈的一類酶的總稱，主要作用是催化蛋白質(zhì)水解。

按其水解多肽的方式，可以將其分為內(nèi)肽酶和外肽酶兩類。內(nèi)肽酶作用于蛋白質(zhì)多肽鏈的內(nèi)部，可以在特定肽鍵處切割，產(chǎn)生多個較小的肽段；外肽酶則作用于蛋白質(zhì)或多肽鏈的末端，逐個將肽鍵水解，釋放出單個的氨基酸。按其作用活性中心，又可將蛋白酶分為絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶等。

為了保護(hù)蛋白，降低蛋白降解的風(fēng)險，在實(shí)驗(yàn)中抑制蛋白酶的活性便是首要的任務(wù)，因此蛋白酶抑制劑身擔(dān)重任。

根據(jù)氨基酸序列的同源性和靶向蛋白酶的不同，蛋白酶抑制劑可分為絲氨酸蛋白酶抑制劑、半胱氨酸蛋白酶抑制劑、天冬氨酸蛋白酶抑制劑以及金屬蛋白酶抑制劑。

實(shí)驗(yàn)中常用的PMSF（苯甲基磺酰氟）就是一種絲氨酸蛋白酶抑制劑，它會特異性的結(jié)合到絲氨酸蛋白酶的活性區(qū)域，從而抑制蛋白酶的作用，保護(hù)蛋白。

但是在實(shí)驗(yàn)過程中，不同類型的蛋白提取物中會含有不同類型的蛋白酶。例如，哺乳動物細(xì)胞提取物中通常含有高豐度的絲氨酸蛋白酶，哺乳動物組織提取物中主要含有絲氨酸、半胱氨酸和金屬蛋白酶，細(xì)菌提取物通常含有較多的絲氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶，植物提取物中常含有大量的絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶，還有一些含有天冬氨酸蛋白酶。

由此可知，在種類多樣的實(shí)驗(yàn)樣本前，單一的蛋白酶抑制劑已經(jīng)不能滿足實(shí)驗(yàn)要求了，于是蛋白酶抑制劑cocktail應(yīng)時而生，其含有多種蛋白酶抑制劑成分，能同時抑制多種蛋白酶活性，對蛋白的保護(hù)更加全面。

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