神反轉(zhuǎn)試劑盒來(lái)啦~~
RNA,每個(gè)生物科研人都不陌生的存在。我們?yōu)榱搜芯縍NA的功能,通常需要通過(guò)反轉(zhuǎn)錄將RNA轉(zhuǎn)化為更穩(wěn)定的互補(bǔ)DNA(cDNA)。得到的cDNA后續(xù)可通過(guò)分子克隆、PCR、qPCR和測(cè)序等技術(shù)做進(jìn)一步的研究。因此,反轉(zhuǎn)錄過(guò)程是許多RNA實(shí)驗(yàn)研究流程的關(guān)鍵步驟。
RNA是反轉(zhuǎn)錄的模板,在提取到濃度和純度合適的RNA后,接下來(lái)便是進(jìn)行RNA反轉(zhuǎn)錄。通常RT-PCR等實(shí)驗(yàn)前需要先用DNase I消化去除RNA中殘留的基因組DNA(gDNA),但是傳統(tǒng)DNase I處理過(guò)程復(fù)雜并容易造成RNA的降解和損失。另外,RNA反轉(zhuǎn)錄酶可能具有不同的性質(zhì)和功能活性,這會(huì)影響其反轉(zhuǎn)錄長(zhǎng)鏈RNA、高GC含量RNA、具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的RNA和不純RNA的能力。所以,現(xiàn)實(shí)中有時(shí)候會(huì)出現(xiàn)RNA反轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)重復(fù)了好幾次,但很玄學(xué)的就是不按照原計(jì)劃出結(jié)果......
思科捷反轉(zhuǎn)錄試劑盒采用高溫反轉(zhuǎn)錄酶,可以通讀GC含量豐富、二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板,極大提高反轉(zhuǎn)錄效率。另外,本試劑盒為一管式反轉(zhuǎn)錄預(yù)混Mix,2×SPARKscript II RT Plus Master Mix中含有反轉(zhuǎn)錄第一鏈合成所需的所有試劑(SPARKscript II HˉRTase、 RNase Inhibitor、Random Primer、OligodT Primer、dNTP Mixture、Buffer)這些屬性改變可增加cDNA長(zhǎng)度和產(chǎn)量,提高靈敏性,改善抑制劑耐受性,并縮短反應(yīng)時(shí)間,試劑盒中還使用了具有DNA分解活性的特殊gDNA Eraser,不需要DNase I消化和后續(xù)繁瑣步驟。
★ 一步反轉(zhuǎn):基因組DNA清除與反轉(zhuǎn)錄15min內(nèi)一步完成;采用二代逆轉(zhuǎn)錄Mix,50-60℃反應(yīng)打開RNA復(fù)雜結(jié)構(gòu)
AG0305 SPARKscript Ⅱ All-in-one RT SuperMix for qPCR(With gDNA Eraser)
01/產(chǎn)品組分
02/反應(yīng)體系和程序
50℃,15min;85℃,5sec
★ 二步反轉(zhuǎn):2 min去除基因組DNA,15min完成反轉(zhuǎn)錄;采用二代逆轉(zhuǎn)錄酶Mix,50-60℃反應(yīng)打開RNA復(fù)雜結(jié)構(gòu)
AG0304 SPARKscript Ⅱ RT Plus Kit ( With gDNA Eraser)
01/產(chǎn)品組分
02/反應(yīng)體系和程序
去基因組DNA:
42℃,2min
反轉(zhuǎn)錄:
若cDNA用于qPCR:50°C,15min
若cDNA用于普通PCR:50°C,30min
思科捷qPCR試劑將熱啟動(dòng)HotMaster Taq DNA聚合酶、dNTP、特殊穩(wěn)定劑、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液和SYBR Green I等試劑預(yù)混成一種適合Real Time PCR反應(yīng)檢測(cè)用的2×濃度的試劑,具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、擴(kuò)增效率高、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。使用時(shí)只需加入模板、引物和水,便可在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線,對(duì)目的基因進(jìn)行準(zhǔn)確定量,檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性好,可信度高。
HotMaster Taq DNA聚合酶是一種采用新型抗體修飾的酶,該聚合酶利用抑制劑通過(guò)溫度調(diào)節(jié)方式封閉HotMaster Taq DNA聚合酶的底物結(jié)合位點(diǎn),無(wú)需額外加熱即可進(jìn)行反應(yīng),最大限度的減少了PCR擴(kuò)增過(guò)程中非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的產(chǎn)生,大大提高了熒光定量PCR反應(yīng)的精確性。
★致力打造優(yōu)美曲線:思科捷SYBR qPCR Mix
性能展示案列: