生物樣本庫中的哺乳動物細(xì)胞或組織提取物含有許多內(nèi)源性的蛋白酶和磷酸酶，在提取蛋白質(zhì)的過程中，這些酶的釋放可能導(dǎo)致提取物中的蛋白質(zhì)降解或去修飾，從而影響后續(xù)的蛋白質(zhì)檢測。因此，加入蛋白酶抑制劑的這一步驟是至關(guān)重要的，它們能夠保證蛋白質(zhì)的完整性和活性，進而提高實驗數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性、重現(xiàn)性和可比性。

      蛋白酶抑制劑通過特異性結(jié)合到蛋白酶的活性中心，與關(guān)鍵氨基酸殘基相互作用，從而降低或完全抑制其催化活性，這種作用機制通常不會使蛋白酶變性，因此能夠保持蛋白酶結(jié)構(gòu)的完整性。

      蛋白酶抑制劑根據(jù)其組分的多樣性可分為兩大類：單一成分和復(fù)合型 (cocktail) 。

1、單一成分蛋白酶抑制劑：

      例如大家最熟悉的 PMSF (苯甲基磺酰氟化物) ，它是一種不可逆的抑制劑，專門針對絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶。PMSF 具有一定的毒性，且在水溶液中的半衰期為 30 min，在細(xì)胞裂解過程中很容易失效。

2、復(fù)合型蛋白酶抑制劑 (cocktail) ：

      這類抑制劑是由多種不同機制的抑制劑按照特定比例混合而成，可起到廣泛的抑制效果，適應(yīng)多樣化的樣本處理需求。

      根據(jù)成分是否包含 EDTA，復(fù)合型 cocktail 可細(xì)分為含 EDTA 和不含 EDTA 兩種類型。EDTA 能夠與金屬離子 (如 Ca2+，Mg2+，Ni2+等)形成螯合物，有效抑制依賴金屬離子的蛋白酶活性。在需要維持金屬離子活性的實驗中，例如純化 His 標(biāo)簽蛋白或進行 2D 電泳時，推薦使用不含 EDTA的蛋白酶抑制劑 cocktail。

      AEBSF：是一種有效的絲氨酸蛋白酶抑制劑，具有高度特異性和較強的抑制能力，對許多絲氨酸蛋白酶有抑制作用。

      Aprotinin：是一種從牛肺中提取的小分子蛋白，能夠抑制胰蛋白酶、血漿酶等絲氨酸蛋白酶的活性。

      Bestatin：是一種氨基肽酶抑制劑，能夠抑制多種氨基肽酶的活性，從而保護多肽和蛋白質(zhì)不被這些酶降解。

      E-64：是一種環(huán)氧酮類化合物，能夠抑制半胱氨酸蛋白酶的活性，如木瓜蛋白酶和組織蛋白酶 B。

      Leupeptin：是一種從細(xì)菌中提取的化合物，能夠抑制絲氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶的活性。

      Pepstatin A：是一種酸性蛋白酶抑制劑，能夠特異性地抑制天冬氨酸蛋白酶如胃蛋白酶的活性。

為得到更佳的實驗結(jié)果，這里有一些小貼士請您留意哦。

均勻混合：在緩沖液中加入蛋白酶抑制劑時應(yīng)充分混勻，以確保其充分發(fā)揮作用。

新鮮配制：推薦現(xiàn)用現(xiàn)配含有蛋白酶抑制劑混合物的裂解液，以保持其活性和效果。

掌握這些細(xì)節(jié)后，現(xiàn)在讓我們?yōu)槟≈亟榻B科研品質(zhì)的守護者---思科捷蛋白酶抑制劑Cocktail

包含6種廣譜蛋白酶抑制劑，能夠有效抑制絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、酸性蛋白酶和氨肽酶等多種蛋白酶的活性，從而保護蛋白質(zhì)的完整性。適用于從哺乳動物組織、細(xì)胞中提取蛋白質(zhì)，能夠更有效的獲得目的蛋白。

即用型濃縮存儲液，不含 EDTA 。

可用于蛋白質(zhì)免疫印跡 (WB)、免疫沉淀 (IP)、免疫共沉淀 (Co-IP)、Pull-down、免疫組織化學(xué) (IHC)、免疫熒光 (IF)、激酶研究等多種分析。

六種蛋白酶抑制劑組成，濃度確定，全方位抑制蛋白酶活性，保護更全面。

在室溫下解凍 DMSO 儲液，按照 1：100 (體積比) 將蛋白酶抑制劑 Cocktail 加入到裂解液中，混勻即可使用。

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